4) と ブルーデキストラン(青い色素 分子量200万)を混ぜた溶液をサンプルとして、ゲル濾過クロマトグラフィーを行う。 分子量の異なる物質を分離できることを確かめる。 課題 :色素溶液をゲル濾過クロマトグラフィーした結果について考察する。 使用する試薬 緩衝液 (9. 57mMリン酸緩衝生理食塩水(PBS), pH7. 35~7. 65) PBSタブレット(タカラバイオ株式会社)10錠を蒸留水に溶かし、1リットルにメスアップする。 色素混合液 (1. 25mg/mlビタミンB 12 と2. 5mg/mlブルーデキストランを含む):(0. 5ml/2人) 色素混合液 10mg/ml ビタミンB 12 100ml 20mg/ml ブルーデキストラン PBS 600ml 10mg/ml ビタミンB 12 100ml 20mg/ml ブルーデキストラン100ml ビタミンB 12 1g ブルーデキストラン 2g PBSで100mlにメスアップ 使用する器具 メモリつきプラスチック試験管 (8本/2人) 試験管立て (1個/2人) 2ml, 1ml 駒込ピペット (各1本/2人) ゲル濾過用カラム (1本/2人): Prepacked Disposable PD-10 Columns (GE ヘルスケア) スタンド (1台/2人) ビーカー (2個/2人):緩衝液用と廃液用 マジック (1本/2人) ラベル (8枚/2人) 実験方法 (Flash Movie) ゲル濾過クロマトグラフィーによる色素分子の分離 試験管にNo. 1~8の番号を書いたラベルシールを貼り、試験管立てに並べる。 ゲル濾過用カラムの下に廃液用ビーカーを置いて、カラムの上下の蓋を開ける。 緩衝液が全てゲル内に移動し、カラムのフィルター上に緩衝液がなくなったら、すぐに下側の蓋をキッチリと閉める。 試験管立てのNo. 1の試験管がカラムの真下にくるようにセットする。 色素溶液 0. ゲル濾過クロマトグラフィー 使用例 リン酸. 5mlをカラムの上部に静かに加える。 カラム下の蓋をはずし、カラム溶出液を試験管に回収する。 色素溶液がすべてゲル内に移動したら、すぐに緩衝液をカラムの上部に満たす。 カラム上部の緩衝液が半分になったら、緩衝液を上端まで足すという操作を繰り返す。試験管に溶出液が2. 5mlたまったら素早く試験管立てを移動して、次の試験管に溶出液を入れる。この操作を8回繰り返す。 溶出液の回収が終わったら、すぐに、カラム下側の蓋を閉める。 カラムの上部に緩衝液を満たし、上側の蓋をする。 画面左下のアイコンについて 3秒間隔の自動でページを進めます。 そのページで停止します。 手動で次のページを表示します。 一つ前のページに戻ります。
6センチ程度ですが、分取GPCの場合には、大容量の送液ポンプと大口径(2-4センチ)カラムが用いられ、比較的大量のポリマー試料を注入して分子量(オリゴマーの場合は重合度)に基づく分離、精製を行うことが可能となります。 測定条件: 基本的に測定溶媒に溶解する高分子が対象となります。測定分子量範囲は数百から数百万とされ、適切な分子量領域の分離ができる孔径のカラムを使用することが重要となります。広い分子量領域の分離を行うためにカラムを複数本接続しての測定も多く行われています。測定溶媒(移動相)には幅広い高分子を溶解させることができるテトラヒドロフラン(THF)が最も広く使用され、クロロホルム、 N, N- ジメチルホルムアミド(DMF)、ヘキサフルオロイソプロパノール、水なども溶媒として使用されます。極性の大きなポリマーなどでGPCカラムへの吸着が起こる際には別種溶媒のGPCカラムを用いることで、測定が可能になる場合もあります。DMF溶媒での測定時には0. 01Mの臭化リチウムを添加することで、GPCカラムへのポリマーの吸着を妨げられるようになることもあります。「高温GPC」と呼称される1, 2, 4-トリクロロベンゼンなど高沸点溶媒を使用するGPCでは、ポリエチレン、ポリプロピレンなどの溶解性が限られるポリオレフィンの測定も可能となります。 測定上の注意点: GPCを実際に使用する際の注意点としては、通常の測定ではあくまでも相対分子量が求まることを理解しておく必要があります。例えば、最も汎用的なTHF溶媒のGPCでは、標準ポリスチレンによる較正曲線を使って、1, 4-ポリイソプレンの分子量を測定すると、1.
フェリチン(440 kDa)、2. アルドラーゼ(158 kDa)、3. アルブミン(67 kDa)、5. オブアルブミン(43 kDa)、6. カーボニックアンヒドラーゼ(29 kDa)、7. リボヌクレアーゼ A(13. 7 kDa)、8. アプロチニン(6. 5 kDa) 実験上のご注意点 ゲルろ過では分子量の差が2倍程度ないと分離することができません。分子量に差があまりないような夾雑物を除きたい場合にはゲルろ過以外の手法を用いるべきです。また、ゲルろ過では添加できるサンプル液量が限定されることにも注意が必要です。一般的なゲルろ過では添加することのできるサンプル液量は使用するカラム体積の2~5%です。サンプル液量が多い場合には複数回に分けて実験を行うか、前処理として濃縮効果のあるイオン交換クロマトグラフィーや限外ろ過などでサンプル液量を減らします。添加するサンプル液量が多くなると分離パターンが悪くなってしまいます(後述トラブルシュート2を参照)。 グループ分画を目的とするゲルろ過 ゲルろ過では前述したような高分離分画とは別に脱塩やバッファー交換にも使用されます。この場合に使用されるのはSephadexのような排除限界の大きな担体です。排除限界とはこの分子量より大きなサンプルは分離されずに、まとまって溶出される分子量数値です。この場合にはサンプル中に含まれるタンパク質など分子量の大きなものを塩などの低分子のものとを分離することができます。グループ分画で添加できるサンプル量は使用するゲル体積の30%です。サンプルが少量の場合には透析膜など用いるよりも簡単に脱塩の操作ができます。 トラブルシューティング 1. 流速による影響 カラムへの送液が早い場合は、ピークトップの位置に変化はありませんが、ピークの高さが低くなりピークの幅も広がってしまいます(図2)。流速を早めただけでこのような分離の差が生じてしまうことがあります。カラムの推奨流速範囲内へ流速を下げる対処をおすすめします。 図2.溶出パターンと流速の関係 2. サンプル体積による影響 カラムへ添加するサンプル体積が多い場合、ピークの立ち上がりの位置は同じですが、ピークの幅が広がってしまいます(図3)。分離を向上させるには、サンプルの添加量を2~5%まで減らしてください。 図3.溶出パターンとサンプル体積の関係 3.
うさぎ 突進 二週間前からネザーランドドワーフを飼っています。 産まれてまだ3ヶ月のオスです。 最近うさぎが寝っ転がっている横に、私もねっ転がり優しく撫でている途中にいきなり顔に突進してきます。(笑) 嫌なんですかね? ( ;∀;) 私がちょっと離れようとしたらついてきたり、 手を舐めてきたり、呼ぶとたまにきてくれたり、 懐いてくれていると思うんですけど、、 これって意味のある行動ですか? 【うさぎ検定に挑戦！】うさぎの行動や気持ち、生態や鳴き声を理解しよう！ | うさぎとの暮らし大百科. ありますあります(笑) うちの子の場合は、私もウサギもゴロンしながら散々ナデナデしてまったりした時間を過ごしていると、突然急に立ち上がり「ぶーーー!」と盛大に鼻を鳴らして私の足めがけて猛ダッシュしてきます。 我が家の場合は、マウンティング開始の合図です。 うちの子はマウンティング以外では一切鳴かない大人しい子なのでとても分かりやすい(笑) 質問差様のウサギも3ヶ月とのことで、そろそろ性成熟してくる時期です。ちょっと反抗的に感じたり、トイレの失敗が出てくると思います。 同時にマウンティングもするようになってきますし、この時期に後追いもマウンティングの一環として始まることが多いです。 性成熟に伴うマウンティング等の行為は、数ヶ月で一旦落ち着きます。 我が家の場合は生後3ヶ月半~4ヶ月くらいで始まり、生後半年まで青春時代を送っておりました(笑) 頭に突進した後はどんな感じなんでしょう?頭にしがみついたりしようとする気配があるならマウンティングかなと思います。突進した後は落ち着きなくウロウロしませんか? 単に舐めるのに近寄っているだけなら大して気にしなくても良いと思います。 なるほど、、、! この前初めてトイレの失敗がありました! 私の足の上で、、笑笑 頭にしがみつくようなことはなく、ただ突進して激突してきます。笑 私が「わぁ!」とびっくりすると 私の周りを落ち着きなくうろうろします。 もう青年に近づいてきていると言うことなのですね^_^
うさぎを家の中で遊ばせていると、毎日同じ場所にあごをすりすりしている光景が見られます。うさぎのあごの下には臭腺があり、そこから出るにおいをお気に入りの場所につけることによって、自分のものだと主張しているのです。 飼い主にすりすりをする場合も同じ。所有権を主張しているのです。 【Q7】うさぎがぬいぐるみに腰をカクカク……! ①ぬいぐるみにマウンティングをしているから ②ぬいぐるみがお気に入りだから ③ぬいぐるみが好きじゃないから 正解は、①ぬいぐるみにマウンティングをしているから! ぬいぐるみに向かって腰を動かす行動は、男の子によく見られます。「マウンティング」は、男性ホルモンの多い女の子にも見られることがあり、交尾の疑似行為ができそうなものを見つけると、自動的に腰を動かしてしまうのです。 【Q8】うさぎが前足を合わせてパンパン! ①前足がかゆいから ②前足の汚れをとっているから ③願いごとをしているから 正解は、②前足の汚れをとっているから! 先に言わせてください。この仕草は多くのうさぎラバーズのハートをわし掴みにしています。実は、この行動はうさぎが顔を洗う(毛づくろい)前に見られます。うさぎは自然界では土の中やほら穴の中で生活しているため、自分の顔をさわるときに前足についた土を落とそうとしているのです。 この行動は飼いうさぎも同じで、土で汚れていなくても本能的に前足同士を合わせます。うさぎの前足は毛で覆われているのですが、爪と爪がぶつかり合うことでパンパンという音が聞こえてくるのです。 【Q9】うさぎがダンッ!と後足を地面にたたきつける ①足の裏に違和感があるから ②周りに危険を知らせているから ③眠くなってきたから 正解は、②周りに危険を知らせているから! こちら「スタンピング」(通称:足ダン)といわれる行動です。自然界で、怪しいにおいや音がしてきたときに足ダンをすると、土の中にいるうさぎたちが逃げることができます。そのため、飼いうさぎでも同じように、なにかいつもと違うことが起きたときにダンッ!と音をたてることがあります。 また、②以外にもスタンピングには意味があり、飼い主さんと遊ぶ前の景気づけにダンッ!と音をたてることがあります。 ここからは難易度★★★ 【Q10】うさぎがゴリゴリ、ゴキュゴキュ……歯ぎしりをしている ①歯が痛いから ②眠っているから ③いい気持ちだから 正解は、③いい気持ちだから!
テンションが上がってくるとウサギは全力でダッシュをしたり、ツイストしながらジャンプをしたりします。 警戒! 耳をぴんと立て、音の方向に耳を傾けます。動画のように二本足で立ち、音のほうをじっと眺めていたりすることもあります。ウサギの耳は非常に良いので、人間には聞き取れない音を聞いていることもしばしばあります。このような仕草が見られた時は、「音が気になるぞ!」「危険が迫っているかもしれないぞ! ?」とウサギは思っているでしょう。 警戒&怒っているぞ!