【本書名】実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ:目的別で選べる遺伝子導入プロトコール〜発現解析とRNAi実験がこの1冊で自由自在!最高水準の結果を出すための実験テクニック 【出版社名】羊土社 お近くに取扱書店が無い場合,特に 海外 でご覧になりたい場合,羊土社HPでのご注文および発送も承っておりますので,下記ご参照のうえ,注文をご検討ください. 羊土社HPでのご注文について 本書を羊土社HPにてご購入いただきますと,本体価格に加えて,送付先・お支払い方法などにより下記の費用がかかります.お手続き等詳細は 書籍購入案内のページ をご参照ください. 分類 項目 費用 国内 消費税 +520円 送料 0円(5, 000円以上,国内送料無料) 手数料(代引きのみ) +300円 海外 航空便送料 第1地帯(アジア、グアム、ミッドウェイ等) +1030円 第2地帯(オセアニア、中近東、北米、中米) +1320円 第2地帯(ヨーロッパ) 第3地帯(アフリカ、南米) +1730円 EMS便送料 +1680円 +2360円 +2600円 +3080円 ※この表は本書のみご購入いただいた場合の費用をまとめたものです.他の書籍を同時に購入する場合はお申し込み金額や重量により費用が異なってまいりますのでご注意ください.
Lentivirus Vector レンチウイルスベクター レンチウイルスベクターについて レンチウイルスベクター Plasmidリスト プロトコールとQ&A プロトコール Lentiviral Vector Preparation (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for Inducible RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Transduction of Human Hematopoietic Stem Cells (Miyoshi, H. Gene delivery to hematopoietic stem cells using lentiviral vectors. Methods Mol. Biol. 246:429-38, 2004. PMID: 14970608) レンチウイルスベクターQ&A (三好浩之博士による) レンチウイルスベクター全般に関しましては、以下の総説をご参考下さい。 三好浩之:レンチウイルスベクター 最新医学 幹細胞研究の最近の進歩(最新医学社)Vol. 実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ：目的別で選べる遺伝子導入プロトコール〜発現解析とRNAi実験がこの１冊で自由自在！最高水準の結果を出すための実験テクニック - 羊土社. 64 (3月増刊号), 232-242 (2009). 三好浩之:レンチウイルスベクター バイオ医薬品の開発と品質・安全性確保(エル・アイ・シー), 612-625 (2007). 三好浩之:蛍光タンパク質遺伝子導入法 レンチウイルスベクターによる導入 バイオテクノロジージャーナル(羊土社)7, 97-105 (2007). 三好浩之:遺伝子導入法(レンチウイルスベクター) 実験医学(別冊) 免疫学的プロトコール(羊土社), 127-137 (2004). 三好浩之:レンチウイルスベクターを用いた造血幹細胞への遺伝子導入 ウイルス Vol. 52, 225-231 (2002). 三好浩之:レンチウイルスベクターによる非分裂細胞への遺伝子導入 細胞工学(秀潤社) Vol. 20, 1234-1242 (2001). 作製方法については、まず日本語のプロトコールをご覧下さい。 レンチウイルスベクターの遺伝子組換え実験レベルについては、「 レンチウイルスベクターについて 」をご覧下さい。 Q1 ベクターに挿入できるインサートの大きさはどれくらいまででしょうか?
A6 SIN( s elf in activating)ベクターは、3'LTRのU3にあるエンハンサー/プロモーター領域を削除してあります。ベクターRNAは細胞に感染後、逆転写の過程で3'LTRのU3が5'LTRのU3にコピーされるので、SINベクターの場合、染色体に組み込まれるベクターDNAのLTRは両方ともプロモーター活性を持たないことになり、安全性の高いベクターとなっています。詳しい説明は、「 レンチウイルスベクターについて 」を参照してください。 Q7 パッケージング細胞はないのか? A7 パッケージング細胞はありますが、pol遺伝子にコードされているプロテアーゼやVSV-Gの発現が細胞にとって毒性が高いので、これらの遺伝子がベクターを産生させる時だけ発現するようにtet inducible systemを使っています。しかし、通常のラボでの解析目的に使用する量のベクターを得るためには、その扱いが煩雑すぎるのであまりお勧めしておりません。同じベクターが大量に必要な場合には、パッケージング細胞にVector plasmidをtransfectionしてstable lineを樹立した方がよい場合もあります。 Q8 ベクタープラスミドにはZeocin耐性遺伝子が組込まれていますが、細胞にウイルスを感染させた後のtransformantのselectionに使用可能でしょうか? A8 Zeocin耐性遺伝子はLTRの外側にありますのでウイルスゲノムには含まれません。従いまして、ウイルス感染細胞をZeocinでselectionすることはできません。大腸菌でのselectionまたはプラスミドをパッケージング細胞にtransfectionしてstable transformantをとるためのselectionに使用します。 Q9 超遠心以外でウイルスを濃縮する方法はないのか?
A1 三好博士によると、約8kbまで挿入できることを確認していますが、インサートが大きいとtiterは落ちます。他のグループの論文 (Hum Gene Ther 12: 1893-1905, 2001) では16kbくらいの大きさまで入るという報告がありますが、やはりtiterは落ちるようです。 また、ベクタープラスミドのサイズが大きいため、サブクローニングが難しいかと思いますので、Gatewayのベクターのご使用をお勧めいたします。 Q2 Transfectionの時、CO 2 インキュベーターを3%にするのはなぜ? A2 リン酸カルシウム法に関しましては、Mol Cell Biol 7: 2745-2752 (1987)を読んでいただければ詳しく出ています。10%と5%ではtransfectionの効率に大きな差がありますが、5%と3%では3%の方が多少よい程度です。インキュベーターに余裕あれば3%をお勧めします。 Lipofectamineなどのリポソーム法でも問題はありませんが、 リン酸カルシウム法で293Tに100%入りますので、安くて経済的です。 Q3 Transfectionの際、Forskolinの役割は? A3 Forskolinはadenylate cyclaseを活性化してcAMPが増加しPKAを活性化することにより、間接的にCMVプロモーターに働き、CMVプロモーターの転写活性をあげます。多くのプラスミド(特にベクター)はCMVプロモーターでドライブしていますので、Forskolinを加えることによりtiterが上がります。 Q4 cPPTとは? A4 レトロウイルスは逆転写の際、3'LTRの直上流にあるPPT(polypurine tract)配列からプラス鎖の合成が始まるが、HIV-1にはゲノムの中央部分にcPPT(central polypurine tract)と呼ばれる同じ配列がもう一カ所あり、ここからも合成が行われるため、最終的な二本鎖cDNAには中央にDNAフラップと呼ばれる約100塩基対の3本鎖構造ができる。cPPT配列は逆転写の効率に影響を与えることが示唆されており、cPPT配列をベクターに組み込むことにより、遺伝子導入効率が高くなるといわれています。 Q5 WPREの役割は? A5 WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element)は、mRNAの核から細胞質への能動的な輸送と細胞質でのmRNAの安定性を高める役割があるとされています。この配列をベクターに組み込むことにより、titerおよび導入遺伝子の発現効率が上がることが報告されています。 Q6 SINベクターとは?
①鹿ヶ壺 目的地となる鹿ヶ壺があるのは、雪彦山の自然の中です。ここは林田川の支流がある坪ヶ谷の、標高335m地点。鹿ヶ壺の川遊びポイントは、落差70mに渡って存在しています。 水流はくねくねと蛇行しつつ、急激に角度を変えながら険しい岩場を下って行くので、まるでうねる竜のよう。滝壺が連続しますが、これは年月をかけて水流が侵食して削り取った姿です。 それぞれの滝壺には、昔と変わらぬ名前が残されています。最上段の鹿ヶ壺から、底無、五郎田壺、雑桶壺、鳥のしこみ、尻壺など全部で9ヶ所。それぞれ川遊びができるポイントです。 滝壺と滝壺の間は天然の滑り台のようになった流れもあり、迫力の川遊びスポットになっています。大人も子供も飛び込みや滑って遊ぶには、勇気が必要なほどの急峻な崖。しかし夏には遊びに来る人が絶えません。 鹿ヶ壺までの散策路 山上の鹿ヶ壺に行くなら、近隣のキャンプ場の駐車場や、奥播磨かかしの里の駐車場などを利用するのがおすすめです。坪ヶ谷の散策路は樹林に伸び、序盤から滝が現れたりと秘境的な空気に満ちています。 散策路は途中から急な階段の道となり、滝の横を通るなど常に絶景と隣合わせなので魅力的。やがて川遊びポイントになる幾つもの滝壺が現れます。最上部の鹿ヶ壺までは、20分ほどの楽しい道のりです。 鹿ヶ壺の遊び方 鹿ヶ壺! !🦌🦌 天然ウォータースライダー行ってきた😳 ばり楽しかった!また行きやしょ😏 人あんまおらんから穴場やで!
雨は一晩中降り続き、夜が明けてからも雨でした。 テントのまわりには水たまり。 ほんのわずか、地面が隆起した場所にテント立てて いたので内部に水が溜まることはなかった。 簡単に朝飯食ってしばらくランドロック内で過ごしていると、 雨も止んできた。 そして、 外に出ていた子供らがなにやら大騒ぎしとる声が! 何事が起こったんかと見に行くと・・・ 写真ではふつーのナメクジに見えるんやけど・・・ これ、10cmちょいぐらいありそうな デカナメクジ(号泣) 初めて見たわこんなん・・・ これは新種やろ・・・とすぐにスマホで調べたら、 ヤマナメクジという生物らしかった! たいがい子供の頃には山で遊んでましたが、 近所の山にはこんなんおらんかったなぁ。 姫路も広いですな。 子供が棒でツンツンすると、 白い液体を噴出しよるし・・・(涙) そしてしばらくしてまた衝撃の出来事が! (大げさ) 心配していた山ヒルの出現。 このあたりはヒルが多い地域で、 昔、雪彦山に行ったときもヒルにまとわりつかれた ことがあった。 なので2週間ほど前、このキャンプ場へ下見に来たときに、 ヒルおるんちゃうやろか?と、あえて 森の中を歩いたりしてヒルを誘うオトリ作戦もしてみたけど、 その時はヒルをキャッチできず。 なのでやや安心しておったんですが、 雨が降って活性化したんかな? 長男と次男の靴や靴下に各2匹、バッチリひっついてました。 念のためテントの中で全裸にして調べてみたけど、 まだ噛まれるとこまでいってなかったので 良かった。 私も怖くなって全裸になって調べてみた(笑) ヒルはしらんまに服やズボンのなかに入り込み、 チュウチュウ血を吸いよるんで油断なりません! グリーンステーション鹿ヶ壺 天気・施設情報 - 日本気象協会 tenki.jp. その後も、ちょっとカラダのどこかで違和感を感じたら、 「ヒルや!! !」 と慌てて服やパンツ脱いでヒルチェックすること数回。 噛まれたところでたいしたことはないけど、それでもあのキモさは ナメクジの比じゃありません・・・。 ま、ある意味子供たちには忘れ難い思い出に なったやろから良しとしとこ(苦笑) 昼飯は焼きそば! キャンプで焼きそばは初めてやったけど、 子供たちには好評やった。 日も少し差すようになり、テント乾かしつつ、散策。 子供達はJボードで遊んでます。 えらい人気のJボードらしいけど、 私はこのあいだ乗って0. 5秒ぐらいでモロに転倒、 腰と両手を骨折したんちゃうかいうぐらい強打したんで 二度と乗りません(笑) 子供らはすぐにマスターするんですけどね。 こちらは区画サイト。 右手前と道挟んでその向かいが小サイトらしい。 その他が大サイト。 ヒル対策には区画サイトがおすすめ(笑) たぶんこっちにはおらんと思います。 コテージ。 ちょうど掃除されとったんで、中をくまなく見学させてもらった。 室内はとても綺麗でした。 雨の日でもコテージなら快適やろなぁ・・・ いやいや、テント泊のほうがおもろいんです(汗) こちらのキャンプ場周辺は、こういう人形?がたくさんおってです。 遠目に見るとほんまの人に見えてしまう。 というわけで、帰る頃にはなんとかテントも乾き、無事終了。 怪我無くキャンプを終えられて一安心。 残念ながら雨の鹿ヶ壺キャンプになりましたが、 子供たちは見たことの無い 生きものに遭遇できて印象に残ったんじゃないかと思います(笑) そういう意味では雨のキャンプも良かった。 次は晴れてほしいけど(苦笑) おわり あなたにおススメの記事 このブログの人気記事 同じカテゴリー( キャンプ )の記事画像 同じカテゴリー( キャンプ )の記事 人形の釣り人の下にアマゴ居なかったです?
0 兵庫県 姫路市 アウトドア キャンプ場 「グリーンステーション鹿ヶ壺」という公園にあるオートキャンプ場やコテージもあるキャンプ場です。周辺には鹿ヶ壺や三ヶ谷の滝などがあり、林田川での川遊びや滝滑りが楽しめます。また、ハイキングコースも整備されています。 鹿ヶ壺キャンプ場 〒671-2416 兵庫県姫路市安富町関775 地図を見る 0790-66-3505 公式ウェブサイトへ あり、無料 チェックイン14:00 チェックアウト13:00(デイキャンプの場合は10:00~17:00) 貸テント 2, 000円
鹿ケ壺キャンプ場の見どころ 鹿ケ壺キャンプ場のバーベキューの見どころ 姫路市のグリーンステーション鹿ヶ壺は、名勝「鹿ヶ壺」や美しい滝や渓谷が隣接した自然体験できる施設です。オートサイト・フリーサイトのキャンプ場やコテージ、屋根付きバーベキュー棟を(イス、テーブル、コンロ 1基で6名分を8基)備えています。バーベキューは食料持ち込み可、機材持ち込み可、燃料持ち込み可、要予約です。また、コンロ、網はレンタルがあります。 ■その他情報 AC電源あり 区画サイトあり フリーサイトあり デイキャンプOK 宿泊施設/コテージ 川遊びOK 雨でもOK(屋根付き) 体験あり/ホタル観賞 駐車場あり 予約必要 備考/ペット禁止
これからはヒルもですが、スズメバチとマムシにも注意が必要ですね(^^;)
'09年9月21日~22日 兵庫県姫路市安富町、 鹿ヶ壺キャンプ場 に行ってきました。 シルバーウィークど真ん中ですが、2日前に予約してOKでした。 先客の撤去時間が13時ごろ、ということで14時ごろに到着予定 …… のつもりが、何せ7年ぶりのキャンプ。しかも最初から最後まで一人というのは初めて。 もうワクワクしてワクワクして、9時半ごろ出発しました。(予想は3時間で到着なのに) そして11時40分、直近の中国道、山崎ICに到着 意外に近かった そこで、近くにある観光スポットへ。 といっても観光目的で来てないので地図に載ってるものから興味を惹かれたところへ出発。 播磨国の国土開発の神、伊和大神を祭る、伊和神社 かつての交通の難所、川にせり出した巨岩をくりぬいた、与位の洞門 通行止めだったけど…… そろそろ時間、ということでキャンプ場へ と思ったら途中に安富ダムが。寄り道、寄り道。 いよいよキャンプ場に到着。なんだかんだで時間通りの14時でした。 受付のおっちゃん曰く、一人で来る奴は初めてだと。 やっぱりソロキャンプする人はキャンプ場とかは使わないのかな? 今回は久しぶりキャンプ&初ソロってことでキャンプ場を選んだけど、やっぱりその辺で野宿、ってのも楽しみの 一つだからいずれやろう。 オートキャンプは不可だが、荷下ろしの時は直近まで入っていいですよ、とのこと。 砂利道と急勾配で走りにくい。こういうときは車が便利に思えてならないです。 いい場所を見つけて設営。 このために買った新テント。部屋が狭くて練習できず、ぶっつけ本番でしたが問題なく完了。 気づいてみると15時近く。近くの施設にビールと薪を買いに徒歩5分ほどの管理棟へ出発。 というか薪売ってなかったらどうするつもりだったんだ?