2021/7/17 16:47 YouTube コメント(0) 引用元 ZEE GAMES 【衝撃映像】セレクション山川選手完成!プルヒのホームランやべぇ…まじで観てくれ…! 【プロスピA】【リアルタイム対戦】 生やってます↓ 【プロスピA】日ハム純正完成させないと!&プルヒについて語りあおう。 tamp=1626452651578. タイガース 連勝も連敗もないヌケヌケ 中継ぎ陣再考を【野球話】 | 自閉症スペクトラム＆ADHD長男の成長記録と野球話. 408 元太くん 僕も山川選手でたので密かにzeeさんの山川の使用感が抜群であることを願ってました笑 pつつぬ これは明日山川選手がホームラン競争で優勝できる予兆 ゆたろーん 極引っ張りじゃなければ右中間左中間飛んでくイメージありますね!使用感めちゃくちゃいいし S SDI 西武純正からしたら羨ましくてたまらない スーパーボール @音速の貴公子 タイムスリップで伊東さんが来れば行けますね! 音速の貴公子 西武純正で、あとはキャッチャーのB以上の選手を獲得出来ればオールB以上です 象マンモス 山川さんの打ちやすさレベチすぎてずっと使っとるw ディグダ・ミクル 今日のホームランダービー、山川だけは外角の球でもレフトスタンドまで運んでいてさすがプルヒだなって思った まほ 1:31 特守で89はチートで草w 道民【ハム党_#43】 背番号33なのめちゃくちゃ好き Y N 特守1回目のメインポジで89はレベチwww Eriksen Kane ブライアントもめっちゃアウトコース引っ張ってホームランに出来るけど明らか飛ばない時あるから、やっぱベストピッチ大事ですね セロハンテープ君@顔にぐるぐるまき 阪神純正の試合で山川のアウトコースホームラン打ったけどあれは相手の球威が低いから入ったんだと思う N V まさにこないだ僕がやったのと同じ感じの引っ張りホームランです(笑) J. P. ワタナベフ いつか山賊打線再現して欲しいです ちゃんねる顎 鷹ファンで純正やってるけど 昨日のオールスターでの山川さんの「小さい頃はジャニーズに入れると思ってた。気づいたら太ってた。」っていうエピソード好きすぎてめちゃくちゃ応援したくなったしこの動画みて更にプロスピでも使いたくなった。(笑) とき 現環境で外引っ張ってあれはえぐいw 動画と関係ないけど、今日のサムネ好き! 🔴と🟢の組み合わせいい感じです👍 だむだむ やべぇ 今確認したら広角山川さん持ってたからスピ開放しようか迷う やまちゃんねるのゲーム部屋 山川選手欲しくなりました‼️ ぽいぽい チャンスがあるのとミートがBなのがでかいほちい!!
(*'▽') _/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/_/ ◆2021年5月27日(木) オリックス● 8-11 ○DeNA 横浜 ▼ゲームデータ▼ ■日時 2021年5月27日(木) 横浜 ■対戦カード 対 横浜DeNAベイスターズ (第3回戦) ■スコア オリックス● 8-11 ○DeNA ■責任投手 勝利投手:D 石田 (1勝0敗0S) 敗戦投手:B 張 (0勝1敗0S) セーブ: ■バッテリー B:張、竹安、漆原、金田 - 頓宮 D:ロメロ、石田、三上、砂田、エスコバー、山﨑、三嶋 - 伊藤光 ■本塁打 B:吉田正 11号(1回表2ラン) 、 T-岡田 6号(6回表ソロ) D:神里 4号(1回裏ソロ) 、 ソト 8号(1回裏3ラン) 、 ソト 9号(6回裏ソロ) ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ◆オリックス・中嶋監督 7失点の張奕に「打たれ過ぎでしょう」 交流戦負け越しスタート ■ポジポジ戦評■ このカード1勝1敗で迎えた横浜での3連戦の第3戦! 最終戦の先発マウンドは今シーズン初登板の 張奕投手 に託します! ( `ー´)ノ ところが先発 張投手 が初回からまさかの大乱調… いきなり2発のホームランを浴び4失点スタート…((+_+)) 2回途中7失点のKOで今シーズン初登板は悔しいマウンドに… その後、急遽バトンを受けた 竹安投手 が踏ん張るも回跨ぎの5回に失点…(;^ω^) 漆原投手 → 金田投手 と継投もそれぞれ1失点づつと踏ん張り切れず、11失点(;゚Д゚) 対する打線は 初回に 吉田正尚選手 の先制2ランで先制! (/・ω・)/ 4回には無死満塁から ロメロ選手 、 頓宮選手 の連続タイムリーで7-5と2点差まで追い上げます! 続く今シーズン初スタメンの 宜保選手 のセーフティスクイズで7-6と1点差まで詰め寄ります!! 6回には好調 T-岡田選手 がライトスタンドへのホームランでスコアを9-7に! (゜o゜) 9回に相手の守備の乱れで1点追加も反撃もここまで…(;^ω^) 今日に関してはちょっと打たれ過ぎましたねww 2点先制の後の初回の4失点が最後まで重くのしかかりましたww 先発投手がゲームを作れさえすれば得点は取れてはいるので、そこを何とかして行けば勝ちを拾って行けるかなと… 明日からは本拠地・大阪でのスワローズ戦!!
25~0. 5 ml/cm 2 (プレート底面が溶液で浸る程度)となるようにRetroNectin希釈液をプレート *2 に加えてプレート全底面に広げ、室温で2時間または4℃で一晩放置する。24ウェルプレートの場合には1ウェルあたり0. 5 ml、6ウェルプレートの場合には1ウェルあたり2 mlのRetroNectin希釈液を加える。 *2 プレートは必ずノントリートメントタイプのものを使用する。 RetroNectin希釈液を除き、適当量の2% BSA/PBS溶液を加えてブロッキングを行う。室温で30分間放置する *3 。24ウェルプレートの場合は0. 5 ml/well、6ウェルプレートの場合は2 ml/wellのブロッキング液を加える。 *3 すぐに使用する場合は、2% BSA/PBS溶液によるブロッキング操作は省くことができる。この場合、ステップ4のPBSまたはHBSS/HEPESによる洗浄を2回繰り返す。 2% BSA/PBS溶液を除き、適当量のPBSまたはHBSS/HEPESで一度洗浄し、それらを除去した後、プレートを保存する。このプレートをRetroNectinコートプレート *4 とする。 *4 2% BSA/PBS 溶液によるブロッキング操作を行った場合は、容器のふたをパラフィルムなどでシールし、4℃で1週間の保存が可能である。 RetroNectin Bound Virus(RBV)-Spin法(遠心感染) 注 マルチウェルプレートの場合、ウェル位置により導入率に差が生じることがある。できる限りプレート中央に近いウェルを使用することをお勧めする。 目的遺伝子を持つ組換えウイルス液の原液、あるいは希釈液をRetroNectinコートプレート上に125~250 μl/cm 2 となるように加える。 32℃で2, 000× g 、2時間の遠心を行い、RetroNectinへウイルス粒子を吸着させる。 プレート上が乾燥しないように注意しながら、ウイルス液を除去し、適当量のPBSまたは0. 1~2%のアルブミン(BSAやHSA)を含むPBSを添加する(溶液は細胞へのウイルス感染直前まで除かない)。 標的細胞懸濁液を調製する。適切な細胞濃度は標的細胞の大きさや増殖率によって異なる。細胞に応じて、0. RNAi実験の基礎 shRNA レンチウイルスによるノックダウン | M-hub（エムハブ）. 05~5×10 5 cells/cm 2 の範囲で検討する。 3.
A6 SIN( s elf in activating)ベクターは、3'LTRのU3にあるエンハンサー/プロモーター領域を削除してあります。ベクターRNAは細胞に感染後、逆転写の過程で3'LTRのU3が5'LTRのU3にコピーされるので、SINベクターの場合、染色体に組み込まれるベクターDNAのLTRは両方ともプロモーター活性を持たないことになり、安全性の高いベクターとなっています。詳しい説明は、「 レンチウイルスベクターについて 」を参照してください。 Q7 パッケージング細胞はないのか? A7 パッケージング細胞はありますが、pol遺伝子にコードされているプロテアーゼやVSV-Gの発現が細胞にとって毒性が高いので、これらの遺伝子がベクターを産生させる時だけ発現するようにtet inducible systemを使っています。しかし、通常のラボでの解析目的に使用する量のベクターを得るためには、その扱いが煩雑すぎるのであまりお勧めしておりません。同じベクターが大量に必要な場合には、パッケージング細胞にVector plasmidをtransfectionしてstable lineを樹立した方がよい場合もあります。 Q8 ベクタープラスミドにはZeocin耐性遺伝子が組込まれていますが、細胞にウイルスを感染させた後のtransformantのselectionに使用可能でしょうか? A8 Zeocin耐性遺伝子はLTRの外側にありますのでウイルスゲノムには含まれません。従いまして、ウイルス感染細胞をZeocinでselectionすることはできません。大腸菌でのselectionまたはプラスミドをパッケージング細胞にtransfectionしてstable transformantをとるためのselectionに使用します。 Q9 超遠心以外でウイルスを濃縮する方法はないのか?
A10 VenusはEYFPのVariantで、理研BSIの宮脇敦史先生により開発されました(Nat Biotechnol 20: 87-90, 2002)。細胞にもよりますが、VenusはEGFPやEYFPよりも数倍から10倍くらい明るく、蛍光顕微鏡やFACSではEGFPと全く同様に扱えます。IRESベクターでは、IRESの下流の遺伝子の発現がかなり低くなりますので、Venusを使用することをお勧めします。 Q11 導入遺伝子の発現レベルが低いのですが。 A11 レンチウイルスベクターでは、組み込んだ遺伝子の発現に内部プロモーターを使用するので、標的細胞において高発現のプロモーターを内部プロモーターとして使用することが重要です。CMV、EF-1α、UbC、CAGプロモーター等での比較や、組織特異的なプロモーターの使用をご検討下さい。 また、遺伝子導入効率が悪い場合には、細胞毒性のでない範囲でMOI(multiplicity of infection)を上げて下さい。 Q12 レンチウイルスベクターによるsiRNAの発現レベルは? A12 レンチウイルスベクターは、レトロウイルスベクターもそうですが、single integrationですので、発現量があまり高くないのが問題となります(H1またはU6 promoter)。したがって、endogenousのtarget geneの発現量が多い場合には、ノックダウンの効果が弱くなります。MOIを上げてmultiple integrationにすることによりある程度解決しますが、やはり発現プラスミドのtransient transfectionに比べると弱いようです。また、3'LTRにsiRNA発現unitを挿入したベクター(コピー数が2になります)でも、基本的にあまり効果は変わりません。いずれにしても、よく利くtarget siteを選ぶことは重要です。 Q13 マクロファージへの遺伝子導入効率が悪い A13 第3世代packaging plasmidでは、vpr欠損のため、マクロファージへの遺伝子導入効率が他の細胞と比べて1桁近く下がります。vprを含むすべてのaccessory geneの入ったpackaging plasmidを使用するか、MOIを上げることにより解決されると思います。また、マクロファージで高発現のプロモーターを内部プロモーターとして使用することも重要です。 (MAN0034j) 2021.