レンチウイルス MMLV アデノウイルス AAV 指向性 広範 感染しない細胞がある 血清型に依る 非分裂動物細胞への感染 感染する 感染しない 安定発現または一過的発現 ゲノム挿入による安定発現 一過的発現、エピソーマル 最高タイターの相対的評価 高い 中程度 大変高い プロモーター選択の自由度 自由度あり 自由度なし 至適使用系 培養細胞とin vivo 培養細胞と in vivo In vivo 生体での免疫原性 低い 大変低い タイターの決定方法は? レンチウイルスタイターの測定にはp24ELISAを使用します。この方法では、サンドイッチイムノアッセイを使用して、レンチウイルス上清中のHIV-1p24コアタンパク質のレベルを測定します。レンチウイルスサンプルを最初にマイクロタイタープレートに加え、そのウェルを抗HIV-1 p24キャプチャー抗体でコーティングして、レンチウイルスサンプル中のp24に結合させます。これに続いて、ビオチン化抗p24二次抗体が添加され、プレート上の一次抗体によってキャプチャーされたp24に結合します。次に、ストレプトアビジンとビオチンの間の相互作用により、ビオチン化抗p24抗体を結合するためにストレプトアビジン-HRPコンジュゲートが追加されます。基質溶液が最終的にサンプルに追加され、HRPとの相互作用で発色します。 着色した生成物の強度は、各レンチウイルスサンプルに存在するp24の量に比例します。分光光度計を使用して強度を測定し、組換えHIV-1p24標準曲線と比較することによって正確に定量化されます。p24値は、対応するレンチウイルスサンプルのウイルスタイターと相関関係にあります。 VectorBuilderのウイルスタイター保証とは? 当社のタイター保証は、ウイルスにパッケージされている領域(Δ5'LTRからΔU3/ 3'LTRまで)がレンチウイルスの搭載制限(9. 実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ：目的別で選べる遺伝子導入プロトコール〜発現解析とRNAi実験がこの１冊で自由自在！最高水準の結果を出すための実験テクニック - 羊土社. 2 kb)を下回っているベクターに適用されます。搭載制限を超えるサイズの場合でも、ベクターをウイルスにパッケージすることは可能かもしれませんが、タイターが低下する可能性があります。あまた、以下のベクターの場合、当社のタイター保証は適用できません: 毒性遺伝子(例:アポトーシス促進遺伝子)、パッケージング細胞またはウイルスの完全性を損なう遺伝子(例:細胞凝集を引き起こす膜タンパク質)などのパッケージングプロセスに悪影響を与える可能性のある配列を含むベクター、および欠失や二次構造を取りやすいい配列(例:反復配列または非常にGC含量が高いシーケンス); パッケージング効率に不確実性をもたらす可能性のある、非公開の配列または非定型レンチウイルス機能要素(LTRなど)を含むユーザー提供のプラスミドの場合。 製造作業日数は、プロジェクト開始から完了までの日数です。お客様から提供されたマテリアル(プラスミドDNAやウイルスベクターなど)が弊社製造拠点に到着するまでの待ち日数、マテリアルの品質検査にかかる日数、そして完成した納品物をお客様に発送するための輸送日数は含まれていません。
今回も実験 プロトコール です。 この目的は、自分の頭の整理・知識の確認の他に、いわゆる「おばあちゃんの知恵袋」的な、文献や教科書に載っていないけど知ってるとちょっと役立つようなことを記録しておくことです。 正確性には注意を払っておりますが、利用の際はご注意ください。 レンチウイルス関連の記事は以下の通り↓ レンチウイルスベクターの保存方法【短期保存】 - こりんの基礎医学研究日記 レンチウイルスベクターの保存方法 - こりんの基礎医学研究日記 【実験プロトコール】ウイルスタイターチェック - こりんの基礎医学研究日記 以下の プロトコール をもとに、ラボの先輩に教えてもらった方法です↓ 直径10㎝ディッシュを用意し、Poly-L-Lysineコーティングする。 ※Poly-L-Lysine(PLL)とは? 細胞膜上の陰イオンと培養容器表面上の 陽イオン との間の相互作用を促進する。つまりプラスチックやガラス面への細胞接着を促進する効果がある。 →省略してもあまり実験に影響ない印象 <やり方> 0.
トランジェント(一過性発現)で実験する場合 細胞を回収してqRT-PCRなどでノックダウン効率を検証する。 B. ステーブル(安定発現)で実験する場合 培地を適当量の ピューロマイシン を含む培地に交換する。細胞により至適濃度は異なりますが、1~10 μg/mLが標準的。 <5日目以降(ステーブルの場合のみ)> 3~4日ごとに培地を適当量の ピューロマイシン を含む培地に交換する。(一般的に10 ~ 12日後くらいでクローンが確立)。 5クローン以上をピックしてノックダウン効果を検証する。 以上、shRNAレンチウイルスによるノックダウンプロトコールを紹介しました。このように数日間にわたって実験を行う場合は、失敗して貴重な時間とサンプルを無駄にしないためにも、事前に手順を頭に入れ、しっかりと準備を整えてから行いましょう。 <無料PDFダウンロード> MISSION ® RNAi 総合カタログ このカタログではRNAiの原理やプロトコル、使用する製品についてご紹介しています。 ▼こんな方にオススメ ・RNAiの基礎を学びたい方 ・これからRNAi実験に取り掛かる予定の方 ・MISSION RNAi製品ならではの特長を知りたい方 無料PDF(MISSION ® RNAi 総合カタログ)をダウンロードする
カチオン性ポリマー。比較的安価なトランスフェクション試薬。 もともと、 24μlと現在の半分の量で最初は教えてもらいました。 しかしウイルスタイターが悪く、 2倍にしてみたところ、タイターがよくなったような気がした ため、それ以降は48μlでやっております。 ※その他レンチウイルス作成に必要なもの ①パッケージングプラスミド(今回はpCAG-HIVgp) ② エンベロープ 糖タンパク質をコードするプラスミド (VSV-G=水疱性 口内炎 ウイルスなど 今回もVSV-G) ③目的のプラスミド(SIN=Self inactivating ベクター プラスミド) 上記混合液を室温で15-20分放置。 混合液を ピペット マンでぴペッティングした後に、ディッシュに均一に播く。 37℃インキュベーション 48時間 ウイルス含有培養上清を50mlシリンジなどで回収。0. 45μmフィルターを通して別シリンジへ。 必要に応じて保存or遠心濃縮。 最初にウイルスを作成したときはとてもタイターが低かったのですが、なぜか繰り返しているうちに、だんだんと安定したタイターが得られるようになってきたような気がします。ウイルスタイターについてはまたどこかで書きたいと思っています。 今回は以上です。
1 図書 生きて動いている「有機化学」がわかる 齋藤, 勝裕 ベレ出版 7 有機化合物確認法 船久保, 英一(1899-1991) 養賢堂 2 有機化学: 基礎化合物から機能材料まで 荒木, 孝二(1948-), 工藤, 一秋 東京化学同人 8 絶対わかる有機化学 齋藤, 勝裕, 講談社サイエンティフィク 講談社 3 有機化学がわかる: 最初のコツさえ覚えればこんなにわかってくるやさしくてためになる有機化学 技術評論社 9 有機化合物の結合と反應 竹林, 松二(1908-) 増進堂 4 基礎有機化学: 有機化合物の構造と反応 Grundon, Michael F., Henbest, H. B., 高橋, 詢(1919-) 10 図解でわかる有機化学のしくみ: 結合のしくみ、亀の甲から「鏡の国」の立体化学、アミノ酸・タンパク質まで 時田, 澄男 日本実業出版社 5 マンガでわかる有機化学 長谷川, 登志夫(1957-), 牧野, 博幸, トレンド・プロ オーム社 11 演習で学ぶ有機化合物のスペクトル解析 横山, 泰(1953-), 広田, 洋, 石原, 晋次 6 12 基礎有機化学 裳華房
【参】モーダルJS:読み込み 書籍DB:詳細 著者 、 牧野 博幸 作画 、 トレンド・プロ 制作 定価 2, 420円 (本体2, 200円+税) 判型 B5変 頁 208頁 ISBN 978-4-274-06957-4 発売日 2014/03/21 発行元 オーム社 内容紹介 目次 シンプルな構成要素で複雑で多くの変化をもたらす有機化学を「マンガでわかる」シリーズで学ぼう! 有機化学の対象となる有機化合物は、炭素、水素、酸素、窒素の主に4つの元素から成り立ちます。構成元素の種類は少ないですが、複雑で多重な結合をすることにより、多様な性質の数限りない化合物ができます。生物の重要な構成物質や、栄養となる物質、薬などの多くも有機化合物です。 有機化学を学ぶ際、記憶しなくてはいけない名称、構造などがとても多く、はじめて学ぶ人にとっては敷居を高く感じる学問です。本書は『マンガでわかる』シリーズの一冊として、有機化学を取り上げています。マンガとわかりやすい本文解説によって、有機化学のエッセンスをわかりやすく紹介しているので入門者にとっては、入りやすい最適な一冊です。 試し読みをする このような方におすすめ 有機化学周辺分野の初級実務者 食品、化粧品をはじめとする化学関連事業に勤める方 化学系を学ぶ大学生 主要目次 プロローグ 第1章 化学の基礎 第2章 有機化学の基礎 第3章 有機化合物の構造 第4章 有機化合物の性質 第5章 有機化合物の反応 エピローグ 付録 生体を作っている有機化合物 プロローグ 第1章 化学の基礎 1. 1 化学って何? 1. 2 有機化合物の分子の骨格は炭素原子である 1. 3 原子の構造と化学結合(原子の構造) フォローアップ 原子の構造 軌道と電子配置 sp^3 混成軌道と単結合 コラム 料理は有機化学の実験 第2章 有機化学の基礎 2. 1 有機化合物の性質の源(官能基) 2. 2 有機化合物の名前のつけ方 二重結合と三重結合 共役と共鳴 コラム 目に見える巨大分子 第3章 有機化合物の構造 3. マンガでわかる有機化学 : 結合と反応のふしぎから環境にやさしい化合物まで | 金沢大学附属図書館OPAC plus. 1 異性体って何? 3. 2 分子の二次元構造と性質(立体配置) 3. 3 分子の三次元構造、分子の鏡の世界(鏡像異性体) 分子式、構造式の見方と書き方 E, Z 命名法 立体異性体のさまざまな表示の仕方 R, S 命名法 立体配座 コラム 物質の匂いが立体構造で変わる 第4章 有機化合物の性質 4.
電気の現象やはたらき、部品の仕組みなど、電気を学ぶ上で、必要で基礎的な事柄を解説しています。マンガと平易な解説文によって電気の基礎をマスターできるような内容にしています。 マンガでわかる 電気回路 飯田芳一 著 山田ガレキ 作画 パルスクリエイティブハウス 制作 978-4-274-06795-2 電気回路の基本をマンガで学ぼう! はじめて電気回路を学ぶ人へ向けて、まずは理解しておかなければならない基本的な知識をていねいに説明しています。基本となる用語の解説から、各種回路の仕組みや理論を適宜イラストを用いて解き明かし、抵抗なく電気回路に親しめるよう構成した基礎学習書籍です。 マンガでわかる 電子回路 田中賢一 著 高山ヤマ 作画 B5変判/186頁 978-4-274-06777-8 電子回路の基礎がわかる! 電子工作でお馴染みのトランジスタラジオ制作を通じて、はじめて電子回路を学ぶ方が無理なく確実に学習できるよう構成になっています。重要な公式についても、マンガやイラストを用いて段階的に説明をしていますので、苦手意識をもつことなく理解できます。 マンガでわかる ディジタル回路 天野 英晴 著 目黒 広治 作画 978-4-274-06958-1 半導体技術に必要なディジタル回路の基本がわかる! 本書は、論理演算などの基本的な回路をマンガで直感的に理解できるように解説しています。さらに、組み合わせ回路や順序回路も理論を解説するにとどまらず、設計まで踏み込んで解説しているため、大変実践的な内容となっています。 マンガでわかる 電磁気学 遠藤 雅守 著 真西 まり 作画 B5変判/264頁 978-4-274-06849-2 身近な現象を題材に、難解な電磁気学をわかりやすく解説! マンガでわかる有機化学 / 長谷川 登志夫【著】/牧野 博幸【作画】/トレンド・プロ【制作】 - 紀伊國屋書店ウェブストア｜オンライン書店｜本、雑誌の通販、電子書籍ストア. まずクーロンの法則を理解し、最短距離でマクスウェルの方程式の理解にまでいくルートを、マンガで身近な生活の現象を例にして紹介。付録では、本書を読むにあたって最低限必要なベクトル、スカラと「場」に関する概念を掲載。 マンガでわかる 発電・送配電 藤田 吾郎 編著 十凪 高志 作画 B5変判/232頁 978-4-274-06924-6 電力供給システム技術の基礎知識がしっかり身につく! 私たちの生活はあらゆる場面において電気の恩恵を受けています。本書は、電力システムの構成、配電システムを解説します。分散電源、スマートグリッドといった、環境・新エネルギーにもふれ、現在の電力システムの機器・設備、運用・制御をわかりやすく解説しています。 マンガでわかる 電池 藤瀧 和弘・佐藤 祐一 共著 B5変判/200頁 978-4-274-06877-5 マンガでわかるシリーズに、身近な「電池」がラインナップ!
1 水に溶けるものと油に溶けるもの(親水性・親油性) 4. 2 沸点の違いを生む原因(分子間相互作用・分極した結合) 4. 3 酸と塩基 4. 4 正六角形の構造を持つベンゼンという芳香族化合物 酸と塩基 ベンゼンの構造 ケト-エノール互変異性って何 コラム 香りの物質は脂溶性 第5 章 有機化合物の反応 5. 1 有機化合物はさまざまな反応で別の分子に変わる 5. 2 炭化水素の反応 5. 3 アルコールの反応 エステル化反応 二重結合への付加反応 ハロゲン化炭化水素の求核置換反応 ハロゲン化炭化水素の脱離反応 ベンゼンの反応(芳香族求電子置換反応) コラム 物質の性質を操る力;有機化学反応 生体を構成する主な有機化合物の概観 タンパク質 脂質 糖質 合成高分子化合物 参考文献 索引 関連書籍
有機化学とは、炭素を主体とする化合物について扱う学問です。炭素の多岐にわたる結合能力の影響で、無数といってもいいほど数が多い有機化合物の構造や性質、反応性などについて、やさしくわかりやすいマンガ形式で理解していきましょう! 第1章 原子構造と化学結合 第2章 有機物の結合と構造 第3章 有機物の種類と性質 第4章 基礎的な反応 第5章 応用的な反応 第6章 新しい有機化学 第7章 高分子化合物 第8章 生命化学 第9章 有機化学実験 ■著者紹介 1945年5月3日生まれ。1974年 東北大学大学院理学研究科博士課程修了、現在は名古屋工業大学大学院工学研究科教授。理学博士。専門分野は有機化学、物理化学、光化学、超分子化学。おもな著書に『絶対わかる』シリーズ:16冊、『決定版!