今週のテニプリ感想です。 Genius378 「最終決戦!王子様VS神の子⑧」 試合は4-5となり、あとリョーマが1ゲーム取れば勝利。 あれれれ?いつの間にかあと1ゲーム? 相変わらずの試合の流れの早さに驚きです。 乾 「まさに天衣無縫・・無我の力を体の内側に溜め込み何らかの形で全く無駄なく体の必要な所に放出して増幅爆発させる つまり・・(省略)」 ・・ごめん、乾。全然分からない(多分皆もスルーしてた・笑) しかも乾にも「天衣無縫の極み」が何なのか分かっていませんでした。 「よう・・バアさん」 と、そこに現れたのは南次郎。 スミレ 「南次郎・・息子がお前と同じ所に辿り着きおった・・」 「南次郎って・・まさかサムライ南次郎!?リョーマ君って伝説のテニスプレイヤーの息子だったの! ?」 桃城 「だだから天衣無縫に・・なれる資質を持っていた訳っスね」 「何をいまさら・・」 とツッコミたかったんですが、皆はリョーマが南次郎の息子だったの知らなかったんですね~。 それよりも次の南次郎の言葉に衝撃。 南次郎 「違うな 青少年 『天衣無縫の極みなんてもんは最初っから無ーよ』」 ・・・な い の !!?? 南次郎 「無ぇっちゅーか・・そーだな・・テニスを始めた時 日が暮れるのも忘れ夢中にやってたろ。どんなにやられても楽しくてしょうが無かったあん時は誰しも天衣無縫なんだよ。 それが部活やスクールに入って試合に勝たなきゃいけねえ、勝つ為にミスを恐れて安全なテニスを覚えやがる。いつしかどいつもこいつもあん時の心を忘れちまう世界に行ってもほとんどの奴がそうだったからなー」 確かにその通りだけど、きっぱり「無い」発言されちゃうと今までの「無我」って一体何だったの?って感じです。 ここは無我を探し求めて何千里の「無我マニア」千歳に聞きたいところ。 そうとはいえ、負けてない幸村部長! ラピスラズリ 今週のテニプリ感想☆. 仁王 「幸村 ここへ来て盛り返し始めたぜよ・・」 真田 「・・幸村」 ブン太も思わずガムを吹き飛ばしちゃってます(笑) 幸村 「(ふざけるな!テニスを楽しくだと! )」 最初、幸村のこの台詞を聞いたときはショックでした。。 入院生活でテニスが出来なかった時間。 その時幸村の「テニスがしたい」という気持ち・・その気持ちって「テニスが好き」な気持ちと同じだと思ってたから。 でも、次の回想・・。 病院で痛みに耐えながら必死でリハビリを頑張ってる幸村部長を見たとき。 「我が立海の3連覇に死角はない!
2と勝利に執着しすぎたあまりに負けた部内No. 1と。テニスのスリルを楽しんでいる不二とテニスそのものを楽しもうとしない幸村と。 リョーマと赤也の対比なんかなかなか可哀想だと思いませんか、赤也が。先生〜いっちばん最初の「もう一人のエース」「主人公のライバル」は赤也だったんじゃないんですか〜? だからあんな早くからトーナメントの最後にあたる学校のエースを登場させてたんじゃないの〜?? 金ちゃんが出てきた辺りから赤也の役回りは変わったような気がします(笑) それにしてもリョーマの優遇されっぷりはいくら主人公と言えど羨ましい限りですね。関東決勝戦なんて全国へは行けるんだから負けると思っていたのに(笑)、勝っちゃうんだもんな〜。同じく全国への切符を手にした立海と全国で再戦、全国で雪辱を果たすのは青学の方だと思ってた。でもリョーマはあそこで真田に勝ててないと全国で幸村に勝てなかったと思うので、あれで良かったのでしょうけど。全国でリョーマと幸村があたるのは見えていたし。ほんとよく出来たシナリオだよ。立海はとんだ噛ませ犬ですよ。 不二と幸村の比較なんて泣きそうになったわ。 面白すぎて 以前も書いた のですが、不二と幸村って似ているキャラのように見えてテニスに於いては真逆ですよね。 もうね、可哀想。 立海が可哀想。みんな報われないね。立海はもうテニスやめたら?? …違うか。 テニスやめたら 呪縛 から解放されるんじゃないんですか?幸村は。 幸村は別にテニス以外にも、好きな事得意な事沢山あるじゃないですか。絵も描けて花も育てられて演劇の演出まで出来るんですよ。テニス以外にも才能がある。「テニスは自分自身さ」と言いながら、テニスしてる時の表情はとても楽しそうには見えないよ。寧ろ屋上庭園や美術室にいる時の方が楽しそうな顔してると思うよ。生き生きしてると思うよ。幸村の心の健康の為にも私はテニスよりも花を、コートにいるよりも美術室にいる事を取った方が良いような気もしています。そりゃあ天衣無縫を極めたテニスをしてくれるのが一番ですけど、 幸村はキャラクター的に天衣無縫にたどり着くのはおもんない(爆) 作品を通して可哀想なキャラランキングNo. 1、憐れなキャラランキングNo. 1、救われないキャラランキングNo. 1の三冠王でないと、幸村は幸村でないと思うんだ(そんなランキングは無い) 可哀想じゃない幸村なんか幸村じゃない みたいなところ、ありませんか、好きです、わたしは、彼の、そういうとこ(歪) というか私密かに思っている事があって。あの人、完治していないのは 心の病 とかそういうのじゃなくて?
テニスを楽しくだと!」と、王者としてのテニスで真っ向勝負を仕掛ける幸村。これはどっちが正しいと言うことではなく、どっちも自分の中の正義を掲げて戦っているのでしょうね。。。 盛り返してきた幸村ですがロブを打ち上げてしまいます。そこに、越前が新技を炸裂。 新技の構え まるでサムライの居合い抜きの構えで放つその新技は 「サムライドライブ」 。シンプルですが 素晴らしいネーミングセンス です。 そしてこれが、どうやら金太郎の 超ウルトラグレートデリシャス大車輪山嵐 を返した技がこれだったようです。 あのボールが半分になった怪現象の真相が、ついに明らかに・・・。 サムライドライブで強烈な横回転が掛かったボールが、ネットとポールの間にある ワイヤー部分で摩擦により2つに切断されてしまう技 だったのでした。 ボールが分裂 これ やり方によっては人殺せる んじゃないでしょうか。 しかし、幸村も負けじと 人間を分身 させて2つのボールを拾い返します。まだまだ勝負は分からない。次週どうなる! 果たして、どんな結末が待っているのか・・・ 画像:(C)許斐剛・週刊少年ジャンプ ■戯言 ちなみに、流石にボールが試合途中に分裂した場合のルールを私は知らないのですが、これはどうなるんでしょう? 現実でも、ひょっとしたら不良品とか老朽化したボールだったらあるのかもしれませんが、越前の場合は故意にやったものと見なされるのか?見なされてもそれでどうなるのか?
レンチウイルス MMLV アデノウイルス AAV 指向性 広範 感染しない細胞がある 血清型に依る 非分裂動物細胞への感染 感染する 感染しない 安定発現または一過的発現 ゲノム挿入による安定発現 一過的発現、エピソーマル 最高タイターの相対的評価 高い 中程度 大変高い プロモーター選択の自由度 自由度あり 自由度なし 至適使用系 培養細胞とin vivo 培養細胞と in vivo In vivo 生体での免疫原性 低い 大変低い タイターの決定方法は? 【実験プロトコール】レンチウイルスベクターの作製方法 - こりんの基礎医学研究日記. レンチウイルスタイターの測定にはp24ELISAを使用します。この方法では、サンドイッチイムノアッセイを使用して、レンチウイルス上清中のHIV-1p24コアタンパク質のレベルを測定します。レンチウイルスサンプルを最初にマイクロタイタープレートに加え、そのウェルを抗HIV-1 p24キャプチャー抗体でコーティングして、レンチウイルスサンプル中のp24に結合させます。これに続いて、ビオチン化抗p24二次抗体が添加され、プレート上の一次抗体によってキャプチャーされたp24に結合します。次に、ストレプトアビジンとビオチンの間の相互作用により、ビオチン化抗p24抗体を結合するためにストレプトアビジン-HRPコンジュゲートが追加されます。基質溶液が最終的にサンプルに追加され、HRPとの相互作用で発色します。 着色した生成物の強度は、各レンチウイルスサンプルに存在するp24の量に比例します。分光光度計を使用して強度を測定し、組換えHIV-1p24標準曲線と比較することによって正確に定量化されます。p24値は、対応するレンチウイルスサンプルのウイルスタイターと相関関係にあります。 VectorBuilderのウイルスタイター保証とは? 当社のタイター保証は、ウイルスにパッケージされている領域(Δ5'LTRからΔU3/ 3'LTRまで)がレンチウイルスの搭載制限(9. 2 kb)を下回っているベクターに適用されます。搭載制限を超えるサイズの場合でも、ベクターをウイルスにパッケージすることは可能かもしれませんが、タイターが低下する可能性があります。あまた、以下のベクターの場合、当社のタイター保証は適用できません: 毒性遺伝子(例:アポトーシス促進遺伝子)、パッケージング細胞またはウイルスの完全性を損なう遺伝子(例:細胞凝集を引き起こす膜タンパク質)などのパッケージングプロセスに悪影響を与える可能性のある配列を含むベクター、および欠失や二次構造を取りやすいい配列(例:反復配列または非常にGC含量が高いシーケンス); パッケージング効率に不確実性をもたらす可能性のある、非公開の配列または非定型レンチウイルス機能要素(LTRなど)を含むユーザー提供のプラスミドの場合。 製造作業日数は、プロジェクト開始から完了までの日数です。お客様から提供されたマテリアル(プラスミドDNAやウイルスベクターなど)が弊社製造拠点に到着するまでの待ち日数、マテリアルの品質検査にかかる日数、そして完成した納品物をお客様に発送するための輸送日数は含まれていません。
Lentivirus Vector レンチウイルスベクター レンチウイルスベクターについて レンチウイルスベクター Plasmidリスト プロトコールとQ&A プロトコール Lentiviral Vector Preparation (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for Inducible RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Transduction of Human Hematopoietic Stem Cells (Miyoshi, H. Gene delivery to hematopoietic stem cells using lentiviral vectors. Methods Mol. Biol. 246:429-38, 2004. PMID: 14970608) レンチウイルスベクターQ&A (三好浩之博士による) レンチウイルスベクター全般に関しましては、以下の総説をご参考下さい。 三好浩之:レンチウイルスベクター 最新医学 幹細胞研究の最近の進歩(最新医学社)Vol. 64 (3月増刊号), 232-242 (2009). 三好浩之:レンチウイルスベクター バイオ医薬品の開発と品質・安全性確保(エル・アイ・シー), 612-625 (2007). 三好浩之:蛍光タンパク質遺伝子導入法 レンチウイルスベクターによる導入 バイオテクノロジージャーナル(羊土社)7, 97-105 (2007). 三好浩之:遺伝子導入法(レンチウイルスベクター) 実験医学(別冊) 免疫学的プロトコール(羊土社), 127-137 (2004). 三好浩之:レンチウイルスベクターを用いた造血幹細胞への遺伝子導入 ウイルス Vol. 52, 225-231 (2002). 三好浩之:レンチウイルスベクターによる非分裂細胞への遺伝子導入 細胞工学(秀潤社) Vol. 組換えレンチウイルスを用いた標的細胞への遺伝子導入（トランスダクション）例：Protocols｜タカラバイオ株式会社. 20, 1234-1242 (2001). 作製方法については、まず日本語のプロトコールをご覧下さい。 レンチウイルスベクターの遺伝子組換え実験レベルについては、「 レンチウイルスベクターについて 」をご覧下さい。 Q1 ベクターに挿入できるインサートの大きさはどれくらいまででしょうか?
カチオン性ポリマー。比較的安価なトランスフェクション試薬。 もともと、 24μlと現在の半分の量で最初は教えてもらいました。 しかしウイルスタイターが悪く、 2倍にしてみたところ、タイターがよくなったような気がした ため、それ以降は48μlでやっております。 ※その他レンチウイルス作成に必要なもの ①パッケージングプラスミド(今回はpCAG-HIVgp) ② エンベロープ 糖タンパク質をコードするプラスミド (VSV-G=水疱性 口内炎 ウイルスなど 今回もVSV-G) ③目的のプラスミド(SIN=Self inactivating ベクター プラスミド) 上記混合液を室温で15-20分放置。 混合液を ピペット マンでぴペッティングした後に、ディッシュに均一に播く。 37℃インキュベーション 48時間 ウイルス含有培養上清を50mlシリンジなどで回収。0. 45μmフィルターを通して別シリンジへ。 必要に応じて保存or遠心濃縮。 最初にウイルスを作成したときはとてもタイターが低かったのですが、なぜか繰り返しているうちに、だんだんと安定したタイターが得られるようになってきたような気がします。ウイルスタイターについてはまたどこかで書きたいと思っています。 今回は以上です。
で作製したウイルス結合プレートの溶液を除去し、速やかに細胞懸濁液を加える。 標的細胞とウイルスベクターの接触を促す目的で、細胞添加後、遠心操作を行っても良い。例えば500× g 、1分間遠心など。 37℃、5% CO 2 インキュベーターで培養する。 Lentiviral High Titer Packaging Mix with pLVSINシリーズ