今回も実験 プロトコール です。 この目的は、自分の頭の整理・知識の確認の他に、いわゆる「おばあちゃんの知恵袋」的な、文献や教科書に載っていないけど知ってるとちょっと役立つようなことを記録しておくことです。 正確性には注意を払っておりますが、利用の際はご注意ください。 レンチウイルス関連の記事は以下の通り↓ レンチウイルスベクターの保存方法【短期保存】 - こりんの基礎医学研究日記 レンチウイルスベクターの保存方法 - こりんの基礎医学研究日記 【実験プロトコール】ウイルスタイターチェック - こりんの基礎医学研究日記 以下の プロトコール をもとに、ラボの先輩に教えてもらった方法です↓ 直径10㎝ディッシュを用意し、Poly-L-Lysineコーティングする。 ※Poly-L-Lysine(PLL)とは? 細胞膜上の陰イオンと培養容器表面上の 陽イオン との間の相互作用を促進する。つまりプラスチックやガラス面への細胞接着を促進する効果がある。 →省略してもあまり実験に影響ない印象 <やり方> 0.
Lentivirus Vector レンチウイルスベクター レンチウイルスベクターについて レンチウイルスベクター Plasmidリスト プロトコールとQ&A プロトコール Lentiviral Vector Preparation (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for Inducible RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Transduction of Human Hematopoietic Stem Cells (Miyoshi, H. Gene delivery to hematopoietic stem cells using lentiviral vectors. Methods Mol. Biol. 246:429-38, 2004. PMID: 14970608) レンチウイルスベクターQ&A (三好浩之博士による) レンチウイルスベクター全般に関しましては、以下の総説をご参考下さい。 三好浩之:レンチウイルスベクター 最新医学 幹細胞研究の最近の進歩(最新医学社)Vol. 64 (3月増刊号), 232-242 (2009). 三好浩之:レンチウイルスベクター バイオ医薬品の開発と品質・安全性確保(エル・アイ・シー), 612-625 (2007). 三好浩之:蛍光タンパク質遺伝子導入法 レンチウイルスベクターによる導入 バイオテクノロジージャーナル(羊土社)7, 97-105 (2007). 三好浩之:遺伝子導入法(レンチウイルスベクター) 実験医学(別冊) 免疫学的プロトコール(羊土社), 127-137 (2004). 三好浩之:レンチウイルスベクターを用いた造血幹細胞への遺伝子導入 ウイルス Vol. 52, 225-231 (2002). 三好浩之:レンチウイルスベクターによる非分裂細胞への遺伝子導入 細胞工学(秀潤社) Vol. 20, 1234-1242 (2001). 作製方法については、まず日本語のプロトコールをご覧下さい。 レンチウイルスベクターの遺伝子組換え実験レベルについては、「 レンチウイルスベクターについて 」をご覧下さい。 Q1 ベクターに挿入できるインサートの大きさはどれくらいまででしょうか?
A1 三好博士によると、約8kbまで挿入できることを確認していますが、インサートが大きいとtiterは落ちます。他のグループの論文 (Hum Gene Ther 12: 1893-1905, 2001) では16kbくらいの大きさまで入るという報告がありますが、やはりtiterは落ちるようです。 また、ベクタープラスミドのサイズが大きいため、サブクローニングが難しいかと思いますので、Gatewayのベクターのご使用をお勧めいたします。 Q2 Transfectionの時、CO 2 インキュベーターを3%にするのはなぜ? A2 リン酸カルシウム法に関しましては、Mol Cell Biol 7: 2745-2752 (1987)を読んでいただければ詳しく出ています。10%と5%ではtransfectionの効率に大きな差がありますが、5%と3%では3%の方が多少よい程度です。インキュベーターに余裕あれば3%をお勧めします。 Lipofectamineなどのリポソーム法でも問題はありませんが、 リン酸カルシウム法で293Tに100%入りますので、安くて経済的です。 Q3 Transfectionの際、Forskolinの役割は? A3 Forskolinはadenylate cyclaseを活性化してcAMPが増加しPKAを活性化することにより、間接的にCMVプロモーターに働き、CMVプロモーターの転写活性をあげます。多くのプラスミド(特にベクター)はCMVプロモーターでドライブしていますので、Forskolinを加えることによりtiterが上がります。 Q4 cPPTとは? A4 レトロウイルスは逆転写の際、3'LTRの直上流にあるPPT(polypurine tract)配列からプラス鎖の合成が始まるが、HIV-1にはゲノムの中央部分にcPPT(central polypurine tract)と呼ばれる同じ配列がもう一カ所あり、ここからも合成が行われるため、最終的な二本鎖cDNAには中央にDNAフラップと呼ばれる約100塩基対の3本鎖構造ができる。cPPT配列は逆転写の効率に影響を与えることが示唆されており、cPPT配列をベクターに組み込むことにより、遺伝子導入効率が高くなるといわれています。 Q5 WPREの役割は? A5 WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element)は、mRNAの核から細胞質への能動的な輸送と細胞質でのmRNAの安定性を高める役割があるとされています。この配列をベクターに組み込むことにより、titerおよび導入遺伝子の発現効率が上がることが報告されています。 Q6 SINベクターとは?
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「生者の行進」を読みました。 3巻18話ではまどかの兄・浩二の友人瞬が殺人事件の犯人だということが判明しました。 それだけではなくまどかを殺して浩二の反応をみるための予行練習で殺しをしていたという最悪の理由です。 そんな瞬にとらわれたまどかの運命は…? 気になる続き3巻19~21話までまとめ・ネタバレ紹介します!
みつちよ丸先生、佐藤祐紀先生のタッグで描かれる漫画「 生者の行進Revenge 」第20話。 今回は前作「生者の行進」から中心人物の一人でもあった、あるキャラが登場。前作ファンは胸アツ展開となります。 さらに綾瀬の持っていた呪いの御守りの中の手紙。省吾が持っているものと内容に微妙な食い違いを見せていきます。波乱展開の序章といった具合である第20話。 注目の内容に仕上がっていますよ!
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話題の『生者の行進』はこんな人におすすめ 『生者の行進』は言わずもがなホラー漫画好きにはとてもおすすめ作品になります。 登場する幽霊はもちろん怖く、主人公の言葉に対する他の人物の反応などは、読者にもリンクしてゾクッと体が震えてしまいます。除霊しても悪化して現れる怨霊たちには、底知れない恐怖を感じられ、夜に読めば眠れなくなってしまうかもしれません。心臓に悪いほど怖いです。 しかし、ホラー好きならそういった心臓の悪さも楽しめる恐怖感となっています。 またホラー好きでなくても漫画好きであれば読んで損はない作品かと思います。ストーリー展開も読者の感情を揺さぶる技術も卓越していて、ホラーが苦手な方でもストーリーの力で話に引き込まれて読み進めてしまいます。 心臓の弱い方にはあまりおすすめできませんが、一般人ほどの心臓を持っているのであれば、是非1巻だけでも読んでみてほしい作品です。おそらく読むのをやめられなくなります。 >>『生者の行進』を無料で読みたい方はこちらから! 管理人の思う『生者の行進』が伝えたいこと(感想) 『生者の行進』は、幽霊よりも生きた人間の怖さを伝えたいように感じられます。 作中で主人公も話していることですが、『生者の行進』に登場する幽霊は生前の残像のようなもので基本的に害はなく、主人公たちを助けてくれることもあります。 しかし、生霊のように生きた人間の思いが霊となったときのおぞましさや凶暴さがこの作品では強烈に描かれています。 そして生きた人間のサイコパスな考え方や歪んだ思想がもたらす行動は幽霊よりもよっぽど怖いです。『生者の行進』を読むと生きた人間の怖さをより思い知らされます。 幽霊だけでなく生きた人間の怖さも描いている『生者の行進』は、読んでいて感情を大きく動かされトラウマになる方もいるかも知れませんが、読後の満足はすさまじいのでこの機会に是非読んでもらいたいです。 >>『生者の行進』を無料で読みたい方はこちらから! 生 者 の 行進 東京の. みつちよ丸 集英社 2018年06月04日 ABOUT ME お得な漫画情報!! 記事を読み終えたあなたへ アプリで基本無料で読めるオススメ作品集! (※それぞれの作品は、期間によっては配信が終了している可能性もございます。) また「20」ものマンガアプリを徹底比較して、おすすめ順にランキングにまとめました! 漫画好きなら絶対に、絶対に、入れておきたいマンガアプリが一目で分かるようになっているので、漫画をアプリで無料で読みたい方は必ずご覧ください!!
みつちよ丸 「その唇を見た瞬間—僕は心臓が止まりそうになった。」第2回連載グランプリ獲得作品が満を持して連載化!日常に這い寄る混沌…!本能を刺激する新進気鋭のホラーサスペンス!! [JC全3巻発売中]
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